产品目录

本制品是由经过特殊工艺处理的HotStart Taq DNA聚合酶、UDG酶、Mg²⁺、dNTPs（含dUTP）、保护剂及赋形剂等组成的预混体系，体系中添dUTP/UDG防污染系统，可有效降解含U的污染物，降低假阳性，是一款专为终点多重PCR设计的多重PCR预混液。本制品中不含甘油及其他影响冻干的成分，可直接用于冻干样品的制备，以提高样品的稳定性和易用性。

经特殊工艺处理后的HotStart Taq DNA聚合酶可以有效减少由引物的非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。此酶与能提高反应特异性的PCR增强剂以及独特的缓冲体系相配合，使反应体系中引物都能有效延伸。此制品适用于高特异性PCR反应、Multiplex PCR（如多重扩增子建库、STR和SNP分型等）、高GC含量（＞65%）等复杂模板的扩增。

• 多重扩增子建库；
  
• 基因分型（微卫星分析、SNP检测等）；
  
• 多重PCR检测。

• 该产品可用于制作冻干粉或冻干小球；
  
• 具有优异的多重扩增能力；
  
• 具有宽广的扩增范围，可以对从50bp到1kb的模板进行扩增；
  
• 具有极高的反应特异性和良好的扩增均一性。

• 本制品中已含有冻干辅料，若需增加其他冻干辅料，需根据实际检测数据评估后增加；
  
• 此产品中含有高浓度的DTT，低温下或者冻融可能会导致沉淀析出，请恢复至室温并涡旋混匀后使用；
  
• 尽量减小各引物间的Tm值差，使用相同的PCR反应程序，每对引物都可以得到有效扩增；
  
• 预先逐一对各对引物进行反应，确认是否有非特异性扩增，并调整引物用量，确保每对引物都能获得足够的扩增量；
  
• 为了减少末端扩增加A不完全的现象，可调整终延伸步骤采用72℃ 15min或延长至30min。

• 样品制备及使用：
  
  • 将10×Multiplex PCR Mix (UDG,for-Lyo)根据需求进行冻干样品制备；
    
  • 将制备后的样品加入10×Rehydration Buffer进行溶解，制备成10×Multiplex PCR Mix (UDG)。溶解后的试剂可置于-20℃保存，下次实验融化后直接使用即可。
    
    • 步骤a和b为必须步骤，不可直接使用10×Multiplex PCR Mix (UDG,for-Lyo)进行PCR扩增。
• 常用qPCR反应体系：
  

  成分	用量
  10×Multiplex PCR Mix(UDG)	2.5μL
  上游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  下游引物	0.2～1.0μM（终浓度）
  模板	0.01～500ng
  ddH2O	至25μL

  
  
• 推荐PCR反应程序：
  

  反应阶段	循环数	温度	时间
  污染消化	1	50℃	2min
  预变性	1	95℃	2min
  变性	30	95℃	10s
  退火		50～60℃	30s
  延伸		72℃	1kb/60s
  终延伸	1	72℃	10min
  保温	1	4℃

  
  
  • 如需更高的防污染效果，可将污染消化时间延长为5min。